Né à San Francisco le 8 juillet 1964, Jeffrey Tambor a commencé à apprendre le métier d'acteur à 12 ans. Il a étudié à San Francisco State, dont il a une licence. Lauréat d'une maîtrise de théâtre de la Wayne State University, il a joué les grands classiques avec le Hilberry Classic Theatre.
Il a débuté au cinéma avec Al Pacino dans le film de Norman Jewison Justice pour tous en 1979 et a tourné ensuite dans La vie, l'amour, les vaches de Ron Underwood, Profession : père au foyer de Stan Dragoti, Article 99 de Howard Deutch, Chienne de vie de Mel Brooks, Trois heures, L'heure du crime de Phil Joanou, Radioland murders de Mel Smith, Heavyweights de Steven Brill, Le souffre-douleur de Steve Miner, Never again d'Eric Schaeffer.
Jeffrey Tambor a été salué pour son interprétation de Clement Greenberg dans Pollock, de et avec Ed Harris. Il était le partenaire de Jill Clayburgh dans Never again, la comédie romantique de Eric Schaeffer. Il a incarné le maire de Whoville dans le film de Ron Howard Le grinch, et le Dr Melvin dans Une vie volée de James Mangold. Il a joué dans Get well soon de Justin McCarthy Mrs. Tingle de Kevin Williamson, et dans Les Muppets dans l'espace de Tim Hill, dont il incarnait le " méchant ", K. Edgar Singer. On l'a vu également dans My boss' daughter de David Zucker, Malibu's most wanted de John Whitesell, Rencontre avec Jack Black de Martin Brest, Docteur Doolittle de Betty Thomas et Mary à tout prix des frères Farrelly.
Il a interprété un grand nombre d'autres séries et de téléfilms dont Eloise at the Plaza et Eloise at Christmastime, et joue actuellement dans la série Arrested Development. Il a été la vedette de téléfilms pour le câble comme The Man Who Captured Eichmann avec Robert Duvall et Weapons of Mass Distraction de Larry Gelbart. Il a joué dans des séries comme La loi de Los Angeles, Hill Street Blues, ou Max Headroom. Il a été la vedette de sa propre série, Mr. Sunshine, et la guest star de nombreuses autres dont un épisode des Contes de la crypte.
Il s'est produit au théâtre dans des pièces comme Sly Fox à Broadway, sous la direction d'Arthur Penn, Mesure pour mesure au New York Shakespeare Festival, La Mouette au Matrix Theatre à Los Angeles. Il a également mis en scène la pièce de Lanford Wilson Burn This au Skylight Theatre de Los Angeles.
En 2004 il est à l'affiche de Hellboy de Guillermo del Toro. Il rempile pour le second volet, Hellboy 2 : Les légions d'or maudites, en 2008. Jeffrey enchaîne sur un projet très différent de Heel boy : Very Bad Trip, une comédie de Todd Phillips où trois témoins partent à la recherche du marié après une soirée de beuverie.
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